Polymerbasierte Nachweiskits IHC - Menschliches Gewebe - Anti-Kaninchen-IgG - Alkalische Phosphatase (AP)

 
Nachweiskits für die Immunhistochemie (IHC), die auf der Polymermethode beruhen, sind neueren Datums als die traditionellen Kits, die Avidin- und Biotin-Konjugate wie ABC-Kits verwenden. Auf Polymeren basierende Kits bieten mehrere Vorteile gegenüber ABC-Kits, insbesondere bei Mehrfachfärbungen (Multiplex) am selben Gewebeschnitt oder wenn hohe Konzentrationen von endogenem Biotin ein Problem darstellen können.
Die auf der Polymermethode basierenden IHC-Nachweissysteme bestehen aus einem Polymer eines aktiven Enzyms, das mit einem für einen primären Zielantikörper spezifischen sekundären Antikörper verbunden ist. Dieses Format ermöglicht es, die Menge des Enzyms am Ort der Lokalisierung deutlich zu erhöhen und somit ein größeres Signal zu erzielen, indem eine größere Menge an Substrat in ein Präzipitat umgewandelt wird. Außerdem ermöglicht dieses System ein einstufiges Protokoll anstelle von zwei Schritten beim ABC-System (biotinylierter Antikörper + Avidin-Enzym-Komplex).
Die Polymere können auf Dextran oder ähnlichen Molekülen basieren, die eine große Größe haben (was in manchen Geweben Probleme verursacht), oder auf Mikro-Polymeren, die leichter in die Gewebeschnitte eindringen.
Die Anti-Rabbit-IgG-Polymer-Detektionskits sind für den Nachweis von primären Kaninchen-Antikörpern bestimmt. Sie enthalten sekundäre Anti-Rabbit-IgG-Antikörper, die an ein Polymer aus alkalischer Phosphatase oder HRP-Molekülen gebunden sind.
Je nach Format können die Kits Blockierungs- und Verdünnungspuffer sowie das Substrat enthalten oder nicht.

 

Die am häufigsten verwendeten alkalischen Phosphatasesubstrate sind Fast Red und Permanent Red. Diese beiden Substrate bilden wasserunlösliche rote Präzipitate, wenn sie durch alkalische Phosphatase (AP) hydrolysiert werden. Aus diesem Grund werden sie im Allgemeinen als Chromogene bezeichnet. Die Lokalisierung der Zielproteine erfolgt dann durch mikroskopische Visualisierung der Präzipitate im Gewebe.

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